Одной из наиболее интересных особенностей защитного механизма является зависимость последующих этапов от предыдущих. Это выражается в том, что для эффективного протекания следующего этапа, необходимо эффективное протекание предыдущего.

Некоторые необходимые понятия, которые не встречались ранее:

• Антирепликация (среди специфичных антител) — слияние антител, в результате которого образуются новые антитела. В микромире репликация (размножение) — это когда одно целое делится на две части (или более). В макромире размножение происходит наоборот — чтобы получить еще одну особь, две другие особи должны «слить(ся)». Этот процесс называется сексуальным контактом или просто сексом. Поэтому с позиций микромира секс — это антиразмножение (антирепликация).
• Гомогенат — однородная масса из измельченных тканей животных или растений.
• Криоскопический показатель — как и «антирепликация», это понятие на 700 страницах книги Ревича упоминается всего 1 раз, поэтому догадаться о том, что оно крайне важно, было не так-то просто. В школе это не проходят, полагаю, что и в институте тоже — во всяком случае, я раньше про такой показатель ничего не слышал — пришлось поискать в интернете. Оказалось, что это, мягко говоря, не самая простая вещь. Есть такое явление, которое заключается в том, что при при добавлении к растворителю растворяемого им вещества, происходит понижение точки замерзания растворителя. Самые простые примеры: добавление соли к воде понижает точку ее замерзания ниже классических 0°С — этот факт широко используется зимой в городах, т.е. понятно, зачем улицы посыпают солью; морская вода не замерзает при 0°С по той же самой причине; добавление спирта к воде дает тот же эффект — на этом основано действие незамерзающих жидкостей для омывания автомобильных стекол.
  
  Насколько я могу понять, криоскопический показатель — это разница между температурой замерзания чистого растворителя и температурой замерзания растворителя в присутствии растворенного в нем вещества (ΔT). ΔT = m*i*K, где m — моляльность (не путать с молярностью), т.е. количество вещества, растворенного в 1кг растворителя (моль/кг); i — коэффициент Вант-Гоффа, характеризующий степень диссоцииации растворенного вещества (для неэлектролитов вроде глюкозы =1, для электролитов — всегда >1); K — криоскопическая константа (своя для каждого растворителя; для воды она, например, =1,86). Т.е. скажем, дистиллированная вода замерзает при 0°С, а нам нужно чтобы она не замерзала до -10°С. Сколько соли нужно добавить к воде? Обычная соль (NaCl) диссоциирует воде практически полностью на Na⁺ и Cl^- — поэтому i=2. С помощью означенной формулы вычисляем m = 10/2/1,86 = 2,69моль/кг. 1 моль NaCl весит 23 + 35,45 = 58,45г (вычисляется по атомным весам, которые берутся из таблицы Менделеева). Тогда 2,69 молей NaCl весят 2,69*58,45 = 157,23г. Значит, если к дистиллированной воде добавить соль в концентрации около 157г/л, то она не будет замерзать вплоть до -10°С.
  
  Из формулы ясно видно, что если криоскопический показатель мал (т.е. как пишет Ревич, стремится к 0), то это может реализоваться только за счет понижения m, ибо K — константа, которая всегда >1, а i — тоже всегда >1. Малые значения m могут наблюдаться только в том случае, если количество растворенного вещества мало. Другими словами, если криоскопический показатель был в норме, а потом резко уменьшился (по абсолютной величине), то это значит, что где-то что-то слиплось. Поэтому организм предпринимает усилие по разбиванию комьев на более мелкие части.
• Лизат — продукт лизиса.
• Преципитант — см. преципитин.
• Преципитин — осаждающий агент, осаждающий реактив, то, что вызывает преципитацию.
• Триггер — пусковой механизм, некий фактор, запускающий какой-то процесс.

Антигенные триггеры

Размышления о многоступенчатости защитного механизма привели к закономерному вопросу: какие конкретные, специфичные для каждого этапа факторы, присутствующие либо в исходном антигене, либо появляющиеся в процессе защиты от него, являются триггерами для последующих этапов? В ходе исследований выяснилось следующее.

1. Самый первый этап защиты, т.е. переваривание крови (гемошок) имеет целью расщепление антигена и/или объектов, с которыми он вступил в связь, главным образом белков. По аналогии с процессом обычного пищеварения, триггером, который запускает этот процесс в крови, является ненормально малое число мицелл. Недостаточность числа мицелл определяется по криоскопическому показателю, стремящемуся к 0. Соответственно, процесс переваривания крови стремится повысить криоскопический показатель до нормальных величин или даже выше.
2. Второй этап защиты, т.е. вмешательство липидов из надпочечников имеет 2 цели:
   
   1. Во-первых, необходимо атаковать свободные липиды, присутствующие в исходном антигене, либо появившиеся в результате расщепления жиров в процессе переваривания крови.
   2. Во-вторых, необходимо связать водорастворимые вещества в комплексы со сниженной растворимостью, чем затруднить их свободный перенос через водные среды организма. Это касается как частей антигена, так и различных продуктов, образующихся в результате переваривания крови.
3. Третий этап защиты характеризуется вмешательством аллергических липопротеидных антител, целью которых является связывание антигена в крупные комплексы, которые можно было бы повторно атаковать со значительно большей интенсивностью. Липопротеидные антитела противопоставляются липопротеидным фракциям непосредственно антигена, либо комплексам, возникающим в результате связи между липидами второго этапа и белками антигена или самого тела (в последнем случае это превращается в аутоиммунитет). Интенсивная коагуляция происходит в результате связывания между собой полярных и неполярных групп липопротеидных антител и липопротеидных антигенов.
4. На четвертом этапе защиты, характеризующемся иммунными (или защитными) антителами, антигенным триггером являются белковые составляющие антигена, что приводит к антирепликации среди специфичных антител.

Еще раз подчеркну, что

Так, например, появление продуктов переваривания крови запускает липидную стадию, центральной задачей которой является их инактивация и обездвиживание. Связь между липидами надпочечников и антигеном приводит к появлению аллергических липопротеидных антител. И, наконец, появление липопротеидных комплексов, судя по всему, способствует появлению финальных иммунных антител.

В стремлении доказать правильность наших выкладок, мы решили попробовать  вводить в организм определенные вещества так, чтобы в ответ на их появление в крови срабатывали вполне конкретные этапы защиты.

Продукты гидролиза (гидролитического переваривания)

Для того чтобы вызвать срабатывание второго этапа защиты, мы решили использовать продукты, возникающие в результате гидролитического расщепления (переваривания) составляющих тела. С учетом концепции двойственности всех состояний, мы разделили продукты гидролиза на а) кислотные и б) щелочные/спиртовые. С помощью KOH, NaOH и нашатырного спирта мы провели гидролитическое расщепление самых разных веществ. От каждой такой смеси отделяли растворимый компонент, обработывали его кислотой, в результате чего получали преципитат. Преципитат хорошо промывали и снова переводили его в растворенное состояние путем добавления щелочи до значений pH чуть меньше 7.0 — эту субстанцию мы назвали «кислотной фракцией», в которой помимо кислых липидов содержатся также кислотные белковые группы и даже гуминовые кислоты.

Ту часть, что после обработки KOH оставалась нерастворенной, отделяли от растворимого компонента и обработывали кислотой. Получающийся в результате растворимый компонент отделяли, снова осаждали щелочью и частично повторно растворяли в кислоте, следя за тем, чтобы рН раствора был около 7.0 — эту субстанцию мы назвали «щелочной фракцией».

В зависимости от степени химического гидролиза можно получить самые разные кислотные и щелочные фракции — более расщепленные или менее расщепленные. Оказалось, что степень этого гидролиза (переваривания) имеет очень большое значение — недостаточное равно как и слишком интенсивное переваривание не годятся — нужно что-то среднее.

Мы исходили из того, что именно эти фракции, возникающие в результате расщепления составляющих тела или антигена, и служащие эквивалентом эффектов, производимых первым этапом защиты, являются триггером для второго этапа, т.е. вмешательства липидов и системы пропердина. Очень важным моментом является то, что на выстраивание этой защиты требуется некоторое время — она возникает далеко не сразу. Следующий эксперимент иллюстрирует правильность наших предположений.

Было произведено внутрибрюшинное введение подопытным мышам кислотных фракций человеческой крови, гидролизованной KOH. Затем мышам с различными временными интервалами прививались 3 миллиона микробов из свежей культуры энтеробактерий Протей. У контрольных животных подобная прививка в 100% случаев является летальной. После инъекции «кислотной фракции» подобный исход по-прежнему наблюдался в течение 16 часов. На 17-м часу появились первые выжившие мыши — 5% от общего числа. С течением времени процент выживших мышей быстро увеличивался и по истечении 22 часов достигал максимума, когда все до единого грызуна выживали. Подобная устойчивость к летальной в обычных условиях инфекции сохранялась и в течение последующих нескольких дней.

Инъекции необработанной крови в той же самой пропорции такого эффекта не дали, что еще раз подчеркивает важность появления в круглосуточной защите переваривающего момента. Наши результаты оказались чрезвычайно похожи на результаты опытов И. А. Парфентьева с малуцидином (продуктом гидролиза дрожжей, инъекции которого мышам делают их невосприимчивыми ко многим инфекциям, включая грам-положительные и грам-отрицательные бактерии, грибки а-ля Кандида или Шигеллы).

Другой нашей идеей было использование липопротеидных комплексов — соединяя антигены с липидами, мы получали новый липопротеидный антиген, который включал липопротеидную защиту. Нередко было достаточно просто смешать антиген с каким-нибудь липидным препаратом.

• При прямом воздействии на убитые микробы брюшного тифа такие ЖК, как олеиновая, линолевая, арахидоновая или элеостеариновая, существенно расширяют производство как агглютининов, так и специфичных иммунных антител. Аналогичный эффект дают ЖК, взятые у представителя того же самого вида, что и подопытное животное.
• ЖК морских свинок показали себя особенно активными в части способствования появлению агглютининов, но не особо эффективными в части стимулирования производства иммунных антител.
• Воздействие in vitro ЖК-фракций таких бактерий, как сенная палочка, коли, дифтерия на убитые микробы брюшного тифа, с одной стороны, приводит к появлению антител к тифу, а с другой — к практически полному отсутствию антител к тем микробам, от которых берутся ЖК-фракции.
• ЖК-фракция бациллы туберкулеза, связанная с убитыми микробами брюшного тифа, вызывает образование агглютининов, но резко снижает и даже полностью блокирует генерацию иммунных антител. Аналогичный эффект дают липиды, полученные из семян Bixa Orellana, а также из рыбьего жира и кальмаров (у двух последних эффект менее выражен).
• А вот назначение жирных спиртов приводит к задержке производства всех антител — как аллергических, так и иммунных.

Аллергические преципитаты

После инъекции животным убитых микробов брюшного тифа, агглютинированных специальной сывороткой[*], иммунные антисыворотки вырабатываются особенно быстро. По сравнению с сыворотками, получаемыми на основе необработанных микробов, для предотвращения летального исхода, наступающего у мышей после внутрибрюшинной инъекции живых микробов, требуется намного меньшая доза сыворотки кроликов, которым делались инъекции смесей подобных [*].

≡≡≡ Для тех, кому предыдущий абзац не вполне понятен, излагаю то же самое в виде последовательных шагов.

1. убитые микробы тифа + некая сыворотка → агглютинины
2. агглютинины + кролик → сыворотка против тифа №1
3. сыворотка против тифа №1 + мышь + летальная доза живых микробов тифа → выживание

либо

1. убитые микробы тифа + кролик → сыворотка против тифа №2
2. сыворотка против тифа №2 + мышь + летальная доза живых микробов тифа → выживание

Первая схема эффективнее, поскольку для достижения того же результата сыворотки №1 нужно намного меньше, чем сыворотки №2.

С другой стороны, инъекции тех же самых убитых микробов брюшного тифа, смешанных с флоккулятом, полученным, скажем, из яичного белка и антияичного преципитанта (сыворотки морской свинки) существенно замедляют появление иммунных антител против брюшного тифа по сравнению с инъекциями необработанных микробов.

≡≡≡ Для тех, кому предыдущий абзац не вполне понятен, излагаю то же самое в виде последовательных шагов.

1. яичный белок + сыворотка морской свинки → флоккулят
2. флоккулят + убитые микробы тифа → сыворотка против тифа №3
3. сыворотка против тифа №3 + животное → выработка иммунитета

либо

1. убитые микробы тифа + животное → выработка иммунитета

Первая схема хуже, поскольку для достижения того же результата нужно намного больше времени.

Еще одной формой липопротеидных комплексов, которую мы использовали с целью вызвать не липопротеидную (аллергическую), а именно иммунную стадию защиты, были аллергические преципитаты. С помощью блендера мы получали гомогенаты из опухолей крыс и мышей, в которых целые клетки более не обнаруживались. Затем путем центрифугирования отделяли надосадочную жидкость, которую и использовали в качестве антигена[**]. Эту жидкость с 3-х дневными интервалами кололи морским свинкам и периодически определяли количество преципитинов в крови, а когда их титр становился достаточно высок, проводили кровопускание — получали сыворотку. Смешивая тот же самый антиген[**] с хорошо разведенными сыворотками, получали флоккуляты, от которых отделяли преципитат и инъецировали животным с подсаженными опухолями. В большом числе случаев — до 70% в некоторых экспериментах — изменения в опухолях начинались уже через 24 часа после инъекции преципитата — опухоли начинали изъязвляться и исчезали в течение нескольких последующих дней.

≡≡≡ Для тех, кому предыдущий абзац не вполне понятен, излагаю то же самое в виде последовательных шагов.

1. опухоль + блендер → гомогенат
2. гомогенат + центрифуга → отделение от осадка жидкой части = антиген
3. антиген + морская свинка → сыворотка
4. сыворотка + растворитель + антиген → флоккулят
5. флоккулят + центрифуга → отделение от жидкой части осадка = противоопухолевый препарат
6. противоопухолевый препарат + животное с опухолью → исчезновение опухоли за неск. дней в 70% случаев.

Промежуточные лизаты + антигены

В качестве антигенов мы пробовали инъецировать микробов и частицы тканей, смешанные с промежуточными лизатами крови. Уже на 2-й день это приводило к защитной реакции, отличавшейся существенной специфичностью. Мыши, получавшие инъекции смеси из кислой промежуточной фракции крови с убитыми микробами, уже через 24 часа демонстрировали устойчивость к прививке теми же самыми, но живыми микробами в дозе, абсолютно летальной для контрольных животных. И защита эта отличалась высокой степенью специфичности.

В других экспериментах (еще не законченных) мы использовали смеси из кислой промежуточной фракции крови с образцами разных опухолей — таким образом мы пытались создать защиту у животных, которым подсаживалась та же самая опухоль.

Напомню, что мы сейчас говорим о том, что называется иммунологической (финальной) частью защитного механизма.

То, о чем здесь говорится, является лишь предварительными данными, полученными еще в 1919 году. В 1942 году этот материал был обнародован на медицинском конгрессе в Мехико и напечатан в журнале Пастер.